光度計是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析的測量儀。它主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。目前,它已經成為現代分子生物實驗室常規儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
光度計的基本工作原理是基于物質對光百度(對光的波長)的吸收具有選擇性,不同的物質都有各自的吸收光帶,所以,當光色散后的光譜通過某一溶液時,其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下,溶液中物質的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關系,即符合比爾定律。T=I/Io lg(Io/I)=εcb 式中,T為透過率,Io為入射光強度,I為透射光強度,A為消光值(吸光度),ε為吸收系數,b為溶液的光徑長度,c為溶液的濃度。從以上公式可以看出,當入射光、吸收系數和溶液厚度一定時,透光率是根據溶液的濃度而變化的。
光度計的特點:
1、采用高性能較好的光柵,波長精度更高;
2、采用進口鎢燈,發光效率高,使用壽命長,功耗降低;
3、超大規模集成,T/A轉換精度高,穩定性高;
4、微機系統的應用,使操作使用簡單可靠。
光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。